天津本生—DMEM(低糖)的注意事项和使用步骤

　　天津本生—DMEM(低糖)的注意事项和使用步骤

　　DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。

　　与MEM比较增加了各种成分的用量，同时又分为高糖型(低于4500gm/L)和低糖型(低于1000mg/L)。

　　DMEM低糖培养基用于养干细胞可防分化，DMEM高糖可养大多数哺乳动物的细胞。

　　注意事项：

　　1、培养及长期放置，需要2-8℃避光保存，请勿低温冻存。

　　2、培养基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不稳定、易分解，长期放置后使用若发现细胞生长变慢可以在使用前加入适量的L-谷氨酰胺，来维持细胞正常代谢。

　　3、含有NaHCO3的培养基开瓶次数较多后培养基内的CO2会逐渐溢出，PH值上升，培养基的颜色会偏紫色。

　　培养基偏碱性会造成细胞生长停滞或死亡，建议分装成小瓶使用或用HEPES调整至正常PH范围。

　　　DMEM(低糖)使用步骤：

　　1、准确称量试剂：根据不同菌类的用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。

　　2、校正PH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线、加热溶解、补充水分、测定酸碱度，常用PH6.8-8.0的精密试纸或酸度计测定。

　　用1NNaOH和1NHCI调节PH值到适宜范围内。

　　3、过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用DMEM低糖纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。

　　4、分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内，塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。

　　5、灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。

　　一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽孢有较强的抗热性，需经高压蒸气灭菌才能达到灭菌的目的。

　　根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。

　　因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。

　　而在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。

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